2025 年 9 月 11 日

医麦客新闻 eMedClub News

9 月 8 日晚，国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）发文就《先进治疗药品沟通交流中 I 类会议申请及管理工作细则》征求意见。这一意见旨在优化先进治疗药品（ATMPs）的沟通交流流程，显著缩短审评对话周期，推动细胞与基因治疗等创新药品早日上市。 

细则关键内容显示，只要满足下列任一条件，可直接按 I 类会议管理，加快沟通效率，缩短沟通时限为 30 日：1、已纳入突破性治疗药物程序的 ATMPs；2、针对基因突变/缺陷等导致的相关疾病，可对病因进行治疗的基因治疗产品；3、完成探索性临床试验后，申请关键性/确证性临床试验启动前、关键性/确证性临床试验期间、以及新药上市许可申请前沟通交流会议的 ATMPs。 

细则强调，与现行《药物研发与技术审评沟通交流管理办法》（2020 年第 48 号）衔接，未新增企业负担。业内专家指出，这一最新细则直击 ATMPs 研发痛点：基因治疗、细胞治疗产品常因技术新颖性面临沟通效率瓶颈。通过将关键节点沟通纳入快速通道，有望压缩研发周期 6-12 个月，推动我国先进疗法与国际同步。 

▲ 2013-2023 年，Emily 往年「打卡照」

（2024 年起，Emily 表示不再更新打卡照） 

众所周知，曾身患绝症的女孩 Emily 在 CAR-T 细胞治疗下实现治愈，迄今无癌生存 13 年。在我国，当下也已有共 7 款 CAR-T 细胞治疗产品获批上市，其中传奇生物的西达基奥仑赛更是率先出海美国，今年上半年销售额已达 8.08 亿美元，成为行业熟知的重磅炸弹药物将是板上钉钉的事。那么后来者如何切入这样一个极具前景的赛道？这个赛道又有哪些技术瓶颈和挑战呢？ 

由于 CAR-T 细胞具有独特生物学特性的活细胞，不完全受我们控制，被称为「活药物」。其在制造过程需要额外的监督和严格控制，以确保细胞的安全和有效。 CAR-T 细胞制造的精细过程始于从患者血液中提取 T 细胞。CAR 基因通过病毒载体、转座子系统或直接 mRNA 转导传递给这些细胞。最终产生的 CAR 蛋白在细胞表面得到表达。最后，CAR-T 细胞在生物反应器中扩增（繁殖），然后准备回输到患者体内。 

由于 T 细胞是活体的，CAR-T 细胞开发者们依赖生物过程来构建它们。因此，开发者必须执行几个质量控制（QC）步骤，以确保这些细胞疗法的功能和安全性。

首先，在转染过程中，CAR 基因将随机整合到 T 细胞基因组的不同位置。这个过程必须密切监测。如果转基因整合到基因组的非编码区域，它将永远不会表达。该基因还可能干扰癌基因并促进肿瘤生长。 

此外，制造商需要精确控制每个 T 细胞中的转基因拷贝（copies）数。CAR 拷贝数过低，表示 CAR 表达量不足，T 细胞无法有效识别并杀伤肿瘤细胞，导致治疗无效；CAR 拷贝数过高，可能引发 T 细胞过度激活，导致细胞耗竭或过早死亡，缩短其在体内的存活时间，降低长期疗效。甚至引发全身性炎症反应（CRS），导致器官损伤和死亡。因此为了确保患者的安全和药物的疗效，监测 CAR 基因的拷贝数以及转基因整合到患者 T 细胞中的位置对于 CAR-T 细胞制造商至关重要。

美国 FDA 建议，对于使用逆转录病毒或慢病毒载体的细胞疗法，每个基因组中应≤5 个拷贝/细胞，以减轻由插入性诱变引起的临床风险。较高的拷贝数可能导致 CAR-T 细胞对患者产生毒性作用。 

再者，通过检测回输前细胞的 CAR 拷贝数，可以预估体内扩增潜力，优化细胞剂量。同时，在治疗开始后，通过追踪 CAR 拷贝数变化，评估细胞在体内的持久性和扩增状态，为后续治疗提供依据。 

科学家通常使用定量聚合酶链式反应（qPCR）来计算 CAR 基因整合。然而，qPCR 只能产生相对的定量结果，需要一个标准曲线进行比较。为了制作标准曲线，生物制造商需要对标准样品进行连续稀释，这是一个耗时、复杂的过程，往往成为实验差异性的根源。此外，qPCR 不能检测每个细胞中单个拷贝的整合；它的灵敏度限制在每个细胞至少有两个或三个拷贝。 

而另一种更灵敏的定量 CAR 基因拷贝数的方法是 Droplet Digital PCR（微滴式数字 PCR，ddPCR）分析。qPCR 和 ddPCR 的原理相似，均使用标准试剂、引物和探针。然而，qPCR 每管只能执行一个 PCR 反应，而 ddPCR 技术涉及将样本分成数万纳米升大小的液滴，每一个液滴中都独立进行 PCR 扩增。如果液滴中包含目标序列（CAR 转基因），那么它将被扩增，荧光探针将发出可检测的信号。是否可被检测的结果将被收集起来，最终比 qPCR 提供更精确的定量结果。通过计算含有转基因的液滴百分比，科学家可以确定样品中该基因的浓度，并从中得出 T 细胞基因组中该基因的平均拷贝数。 

主要优势： 

1. 无需标准品（标准曲线），对靶标分子实现绝对定量； 

2. 可以实现 0.01% 或以上的突变检出率，更高的灵敏度； 

3. 有效区分浓度差异（变化）微小的样品，更高的精密度和重复性； 

4. 不依赖扩增效率，能克服 PCR 抑制剂的影响，特别适合基质复杂样本的检测； 

5. 操作过程和结果分析简单。 

ddPCR 技术流程： 

ddPCR 不仅用于 CAR-T 细胞制造和安全性测试的上述领域，还可用于监测经过基因工程改造的细胞的持久性和活性，解决对细胞安全性的担忧。 

例如，FDA 担忧 CAR-T 细胞的复制可能导致患者体内形成快速进展的 T 细胞肿瘤。为确保安全，FDA 建议科学家测试临床批次、细胞产品及 CAR-T 治疗患者的血液。

ddPCR 可检测 CAR-T 细胞中的复制病毒，筛选受感染细胞，并检测其他微生物污染来源。 ddPCR 还可用于检测 CAR-T 细胞在患者治疗后的持久性。这些细胞应在人体内存活数月。若存活时间不足，疗效有限；若持续过久，可能产生不良副作用。病理学家可利用 ddPCR 定期监测血液中的 CAR-T 细胞计数，跟踪细胞的持久性。 

总的来说，ddPCR 可以协助确保 T 细胞含有正确数量的 CAR 基因拷贝，从而使治疗安全有效。未来 ddPCR 将可能进入更多的临床实验室，帮助改善 CAR-T 细胞治疗的多个方面，并帮助其在未来的个性化癌症治疗中提供更准确和有效的治疗方案。 

在最为知名的 CAR-T 细胞检测之外，ddPCR 技术还在 AAV 基因疗法、质粒、活菌和 mRNA 等产品的质量分析中也扮演着非常重要的角色。2025 年 9 月 12 日（周五），一场汇聚全球顶尖专家的行业技术交流会 Droplet Digital PCR World 2025 将在线上举办。这一会议邀请到多位 CGT 领域专家，聚焦细胞基因治疗产品开发、生产和质控，共话技术研究，助力加速 CGT 产品商业化进程。点击扫描下图或文末「阅读原文」即可参与报名。 

参考资料：

1.https://www.cde.org.cn/main/news/viewInfoCommon/ad53943229c9edd2e708f79c9053e38e

2.https://mp.weixin.qq.com/s/_WPLPog30jKZWBVT1xz1xg

3.https://mp.weixin.qq.com/s/4xRuKKwgWMwDr-RJby_e0A

4.https://mp.weixin.qq.com/s/B5xb5ux0SHjp14wd9SruUA

5.https://mp.weixin.qq.com/s/coQgcg82bpHOApr41bLRbQ