2023-01-04 14:30:35来源：驾玉生物&Charles River浏览量：2814
CGT作为最新的生物药品比起重组蛋白、单抗等成熟生物制品在生物安全性控制方面具有更大的工艺复杂性及产品独特性。除了产品生产的源头为不同种类的细胞外、工艺的多样性导致往往很难对于每个产品的生物安全性控制策略采取标准化一刀切的判断方式。产品开发者必须按照对于原始细胞株来源与制备过程的了解，及目标市场药监及其他监管机构的要求做全面的风险评估，然后按照风险的严重等级采取系统化的控制。生物安全风险分成几大类，其中最复杂的、尤其是针对CGT产品而言是病毒安全性控制。
生物制品的病毒污染风险分成内源病毒、外源病毒、辅助病毒。其中、内源病毒为生产体系从设计而自带的病毒风险，外源病毒为生产过程中可能引进的病毒风险。由于CGT产品的原始细胞株一般是人源或猴源的细胞株、包括293系列、Vero、iPSC、间充质干细胞等，每一种又有不同细分来源，生物药行业对于这些细胞系的安全性研究总体来说还不够全面、所以这些病毒对于生产车间人员及临床实验供试者的潜在生物安全危害必须要通过大量质量风险评估基础上的合适病毒检测来证明可以得到有效控制。与其它传统生物制品的共性之一，是CGT产品的细胞株及GMP细胞库开发及扩增过程中大多会用到动物来源的关键物料，比如胎牛血清（牛源）以及胰酶（猪源）等，由此带来一些动物源性的病毒因子到终产品并通过给药渠道被输送至使用者体内，从而会导致相关传染性疾病的发生，这个后果除了给患者造成身体损害，也给生物制药生产企业造成巨大压力以及经济损失。所以，CGT产品所牵涉的主细胞库（MCB）、工作细胞库（WCB）、终末细胞（EOPC）及纯化前上清液（UPB）都需要做严格的病毒检测。除此以外，生物制品及其相关生产基质及中间产品等也需要进行行之有效的病毒检测，所有这些检测是生物制药行业质量控制的重要指标。细胞库只有完成这些检测后才能用于GMP生产。
最新的ICHQ5A(R2)对于生物制品的细胞库检测列出以下几大类（附图Table1）：CGT产品研究者必须针对自身产品的起始细胞株来源、构建、培养过程及细胞库建设的环境、物料及其他流程来评判内源病毒、外源病毒、辅助病毒的种类和污染风险，并对于可能有的病毒在最终CGT产品中存在与否、及数量多少进行科学及检测方法学的研究，检测方法必须通过验证证明其专属性和灵敏度能够达到保障生物制品生物安全性的要求。
其中需要特别指出的是，在ICHQ5A（R2）专门针对NGS方法进行了说明。具体如下： NGS（也称为高通量测序）可用于广泛的病毒检测。NGS可以提供确定的病毒检测灵敏度和广度，并可以减少动物使用和测试时间。对于使用的任何NGS方法，应提供验证包以支持其在应用中的使用。这包括方法验证和分析方法确认或基质特异性的确认（视情况而定）。基于潜在的安全问题，生物信息学分析可以针对特定病毒，也可以针对未知病毒检测。NGS可以用广谱病毒检测来替代体内实验，以检测未知或未曾预见的病毒种类。NGS还可以补充或替代体外细胞培养试验，以检测已知和未知或未曾预见的病毒种类。此外，该测定也可用于检测已知病毒，并且它可替代HAP、MAP和RAP试验以及其他病毒特异性PCR测定。
NGS 的使用可在以下情形下被特别考虑：检测或表征细胞基质或细胞库中已知和未知病毒，病毒种子或者病毒收获液中由于没有有效的中和载体病毒措施而对检测产生干扰时，或者产品本身毒性或培养基组分存在毒性时。
ICHQ5A R2 Table 1. Virus Tests Recommended to Be Performed Once at Various Cell Levels （建议在不同细胞水平进行一次病毒检测）
a. 应按上表所述对每个WCB进行外源病毒测试。适当时，如果在MCB上进行了外源病毒检测，并且培养至LIVCA或LIVCA以上的细胞来自WCB并用于检测外源病毒的存在，则可省略对初始WCB的类似检测。通常不建议WCB进行抗体产生实验。在每个WCB上而不是在MCB上进行完整检测的替代方案也是可以接受的。
b. 限定代次细胞：用于生产的达到培养限定代次的细胞（Cells at the Limit of In Vitro Cell Age Used for Production）
c. 也可能检测到其他病毒
d. 如果已知一种细胞系组成性地产生逆转录病毒颗粒，则可能不需要该检测
e. 适用于已知已被此类病毒感染过的细胞系
f. 体外病毒检测直接在WCB或直接源自该WCB的LIVCA细胞上进行。基于风险评估，使用NGS进行病毒检测可以用作体外检测（细胞培养法和PCR法）的补充或替代检测
g. 可根据风险评估进行体内法检测。然而，体内实验对于表征良好的细胞系是非必须的，如CHO、NS0和SP2/0，具体需要根据细胞系历史，先验知识以及其他基于风险的考虑。这包括原始（亲本）未转染细胞系的体内病毒试验或NGS试验以及从原始细胞库衍生MCB的控制。还应考虑对来自同一原始细胞库的其他MCB进行病毒安全性测试的先验知识，包括用于建立MCB的方法。如果第一个WCB或后续WCB是在批准的受控条件下准备的，则通常不需要进行测试。对于LIVCA的细胞，基于先前的知识和其他基于风险的考虑，可能不需要进行测试。如果残留风险仍然存在，可以考虑保留体内检测或用检测广泛病毒的分子生物学方法（如NGS或PCR）替换，以检测可能在MCB建立期间或LIVCA阶段细胞培养期间引入的病毒。
h. 例如MAP、RAP、HAP，其通常适用于啮齿动物细胞系。病毒特异性PCR或靶向分子方法可以用作动物试验的替代
i. 例如基于细胞系的起源和历史，包括相关的原材料和试剂
j. 适用时，应考虑使用NGS替代体内试验，并可根据试验适用性和风险评估，用于补充或替代体外试验和其他病毒特异性试验
CGT产品常见的内源病毒包括逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、慢病毒等，每一种的风险点不同、检测方法也都有所不同、有的病毒需要2-3种不同方法结合使用才能完成安全性检测。慢病毒在CGT上市产品中既被当作最终产品、又广泛被当作基因编辑的载体来用，慢病毒的最大生物安全性风险是在细胞库构建及生产工艺步骤中产生载体部件重组、造成野生型可复制性慢病毒(RCL)的产生，从而对受试者的安全造成严重后果。所以，可复制性慢病毒RCL检测是中美欧药监机构统一要求并强调的生物安全性检测项。
随着CGT生产用物料来源的多样性和非GMP级别特质，工艺的非标准化，行业多处于临床早期阶段，如何正确判断外源病毒因子的污染风险尤其具有挑战，企业必须具有技术和质量专业人员能够结合法规、指南要求来系统分析所用细胞株/细胞库涉及的具体供应链生产全流程从而制定对于外源病毒检测的方案，然后开展方法学研究和验证等，才能对细胞库进行放行前所需做的检测并结果符合质量标准。CGT产品与传统重组蛋白如单抗等在检测样品种类方面有着本质上的区别，传统重组蛋白所最常用的CHO细胞系的病毒检测经验不能简单套用，例如，细胞混合液和病毒上清等在检测时如何处理都是复杂的问题，不能轻易套用重组蛋白的方法学，否则会出现假阴性或假阳性的检测结果，造成产品安全性风险。所以，CGT检测技术的个性化和试用性考察不容忽视。外源病毒检测方法又分体外和体内检测两大类：体外检测方法根据细胞株/库的来源分成一般、牛源、猪源、人源、猴源等病毒检测，每一种种属又分成多种病原体与指示细胞的合理组合和对应反应的测定来最终完成，可谓复杂的系统工程；传统的体内检测方法一般会用到几种不同的动物类型及胚胎与病原体的结合。完成体内体外病毒检测需要长期的生物药产业化经验和技术平台的搭建、实验系统的合规性必须从实验室设计、质量体系（需要GMP）、人员资质、检测细胞来源及质量控制、试剂耗材管理等多方面达到药监机构要求，在这些前提下的检测方法及方法验证和检测数据才能被监管机构认可作为可以用来做CGT临床或商业化样品GMP生产的原始细胞库。
由于生物制品细胞库，尤其是CGT产品的细胞库的生物安全性保障直接关系到最终产品的生物安全性，而病毒的风险尤其复杂，需要高度专业性团队的支持。另外，用于多种病毒检测的活病毒对于CGT生产企业的设施设备有直接污染风险、欧美生物制药企业和市场一般对于细胞库的检测采用委托第三方有资质及有经验的服务方来完成。制药企业在选择第三方检测公司时务必要关注以上所提及的所有要求，以避免因为第三方检测实验室不合规或技术不成熟造成的病毒检测缺陷项。
中国CGT行业细胞库的检测服务商目前所面临的3个主要挑战来自于：1）技术方面的挑战，外源病毒检测对于不同产品的需求复杂及多样化，目前主要CGT产品种类的病毒检测涉及超过近70种常用内外源病毒的检测方法；2)法规方面的挑战，以中、美药监机构对于体外法外源病毒因子检测基本思路是一致的，但是在用于各自区域申报时，涉及到检测用的具体病毒和指示细胞种类是有区别的，这个状况让一些有意在中、美同时申报的生物制药企业面临着比较纠结的局面；3)GMP执行不到位，药品监管机构对于生物制品的监管愈加严格，细胞库放行检测中任何GMP合规执行的不到位，都会导致制药企业前期辛苦的研发前功尽弃。因此，选择合适的有资质的供应商将对CGT产品质量安全和海外申报的顺利与否产生重要的影响。
驾玉生物太平洋检测中心目前已经具备了所有以上提及的常见CGT产品细胞库生物安全性所需要的检测方法、包括70种常用病毒检测，所有检测服务都在驾玉生物自建的、符合中美欧GMP要求的实验室及质量管理体系下提供，检测结果可直接按客户需求输入中美欧药品IND-BLA的申报资料，并开放对于各国药监机构的GMP审计。驾玉生物的客户也可以按照质量协议定期对于驾玉实验室进行GMP审计。驾玉生物是中国首家以生物制品质量服务为焦点、符合中美欧GMP合规要求的新型CXO公司，成立于2017年5月，过去5年内，在GMP质量体系及产品QA/QC/QV及相关药监注册申报服务方面已成功帮助客户交付50多个项目的IND到BLA申报，其中包括中国和美国生物大分子产业化领军企业，包括单抗、ADC、CGT、mRNA产品公司以及中美领军CDMO。
2020年底，驾玉生物与全球Top 10 CXO，查尔斯河实验（Charles River Laboratories ，CRL）达成战略合作伙伴关系，驾玉生物是中国唯一获得CRL信任、投资（A轮）和战略合作关系的CXO企业。驾玉在中国的生物制药综合检测实验室已被CRL认证为其全球生物药GMP检测实验室的无限制第三方承包商。驾玉生物严谨的 GMP执行策略和国际化生物制药CMC专家林巧和David Kapitula博士领导的高素质的专业团队是驾玉开展生物制品细胞库检测服务的基石，会在在技术及法规层面充分体现驾玉生物本身的高度，加之与美国CGT检测业务巨头Charles River Laboratories的战略合作，使得驾玉的细胞库检测平台更是具有国际先进的理念指导下的中国本土运营典范，有对于技术转移以及梳理并消化国内外在此领域的差异的特殊优势、从而能够帮助中国生物制药企业在国内外申报需求方面有量体裁衣般的选择，消除了国外服务商在此领域的垄断局面，无论从缩短检测周期还是降低检测成本方面，都会对中国CGT产品开发中的生物安全性保障以保障世界各地的药品申报起到明显的推动作用。
除了细胞库病毒检测外、驾玉生物生物制药检测实验室专注于符合中美欧各国GMP要求包括药典的质量控制检测服务和GMP细胞库综合业务。检测内容从各种细胞库到质粒菌种库、病毒库、培养基、CGT中间产品及终产品、载体等，方法平台包含常见微生物、内外源病毒（体内体外）、RCL(可复制性慢病毒)、RCR、逆转录病毒、各种分子检测、细胞活性和生物工艺残留方法等，所有委托驾玉检测的客户还可以享受驾玉专业的一站式生物样品进出口申报指导及代办，结合驾玉的Bio-CQOR和冷链管理业务，驾玉检测业务在品牌、专业、合规、国际化、领导团队各方面都处于中国国际化标准的本土细分行业领先地位。驾玉生物为覆盖全产业链的GMP质量管理服务，成立5年来共服务了50多家中美生物制药领军企业中国生物制药行业的研发和产业化、尤其是打入欧美先进医药市场做质量与合规的保驾护航。
Charles River成立于1947年，致力于为全球制药企业、生物技术公司、政府机构及科研院所提供必要产品及服务，加速其研究和药物开发进程。我们在全球拥有110+家分支机构。2021年，Charles River 参与了86%的美国FDA批准上市新药的研究开发。
关于Charles River 生物制品解决方案：
Charles River为全球客户提供生物制品检测整体解决方案，结合50多年在生物制品领域的长期经验，我们为客户提供众多GMP或GLP检测方法以满足不同地区监管要求。平均每年接受超过200次的客户审计和6次法规部门的审计。每年执行超过10万次检测和出具超过2万份报告。
热点服务包括：细胞株检定、病毒清除验证、宿主细胞蛋白残留检测方法开发、NGS检测，可进行抗体药，细胞治疗，基因治疗的申报检测和放行检测等，并提供细胞基因治疗CDMO服务，尤其适用于中美/中欧/中日等具有海外申报需求的生物制药用户。
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